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免疫组化问题解答
发表者:北京威斯尼斯人官方网站登录welcome      发表时间:2016-2-15
1 染色过强 原因 解决方法 a 抗体浓度过高或孵育时间过长 降低抗体滴度、抗体孵育时间:室温1小时或4度过夜 b 孵育温度过高超过37度 一般在室温20-28度 c DAB显色时间过长或浓度过高 显色时间不超过5-12分钟,以显微镜下观察为准 2 非特异性背景染色 原因 解决方法 a 操作过程中冲洗不充分 每步冲洗3次每次5分钟 b 组织中含过氧化物酶未阻断 可再配置新鲜3%H2O2封闭孵育时间延长 c 组织中含内原性生物素 正常非免疫动物血清再封闭 d 血清蛋白封闭不充分 延长血清蛋白封闭时间 3 染色弱 原因 解决方法 a 抗体浓度过低、孵育时间过短 提高抗体浓度、孵育时间不能少 于60分钟 b 试剂超过有效使用时间 应更换试剂 c 操作中添加试剂时缓冲液未沥干 每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液 使试剂稀释 (应防止切片干燥) d 室温太低 低于15度 要改放在37度孵育箱孵育30-60分钟或4 度冰箱过夜 e 蛋白封闭过度 封闭不要超过12分钟 4 染色阴性 原因 解决方法 a 操作步骤错误 应重试 设阳性对照 b 组织中无抗原 设阳性对照以验证试验结果 c 一抗与二抗种属连接错误 仔细确定一抗二抗种属无误 威斯尼斯人官方网站登录welcome
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